Comment tester la concentration en amylase Enzymes

July 5

Comment tester la concentration en amylase Enzymes


Les enzymes amylases sont produites dans le pancréas et dans les glandes salivaires et aident à digérer les hydrates de carbone et de processus. Lorsque le pancréas devient malade, l' amylase est libérée dans la circulation sanguine. Quand un patient éprouve des problèmes de l' appareil digestif ou il y a la maladie du pancréas, un médecin vous prescrira un test sanguin pour déterminer le niveau d'amylase dans le sang. La surveillance des taux d'enzymes amylase donnera beaucoup d' informations sur la progression de la maladie et les effets du traitement.

Instructions

Préparation d'une courbe standard Starch

1

Allumez le spectrophotomètre et le mettre à une longueur d'onde de 620 nm. Laisser l'appareil se réchauffer pendant un minimum de 10 minutes pour que la réponse sera stable pendant l'expérience.

2

Énoncer six tubes à essai, les étiqueter 1-6 et les placer dans un rack de tube à essai. Disposer les solutions d'amidon, de l'eau déminéralisée et une solution KI / iode sur la paillasse.

3

Remplir le tube 1 avec 3ml d'eau déminéralisée à l'aide d'une pipette; ce sera le blanc. Remplir des tubes 2-6 avec 3.0ml, 2.9ml, 2,7 ml, 2,4 ml et 2,1 ml d'eau déminéralisée, respectivement. Ajouter une solution d'amidon à chacun des tubes 2-6 dans l'ordre suivant: tube 2 se 0ml, tube 3 obtient 0.1ml, tube 4 obtient 0.3ml, tube 5 obtient 0.6ml et tube 6 obtient 0,9 ml.

4

Ajouter une goutte de solution de KI / iode pour chacun des six tubes. Mélanger soigneusement chaque tube à fond avant l'enregistrement de leur absorbance dans le spectrophotomètre.

5

Remplir la cuvette avec la solution à blanc, nettoyer l'extérieur de la cuve et la placer dans le trou blanc du spectrophotomètre. Régler l'absorbance à zéro. Toutes les autres solutions donneront une absorbance positive.

6

Remplir la cuve d'échantillon avec chacun des cinq autres solutions tour à tour. Essuyez l'extérieur de la cuvette avant chaque mesure. Notez la valeur d'absorbance pour chaque tube. Rincer la cuvette avec la nouvelle solution au moins une fois avant de remplir pour le test.

7

Faire un graphique qui trace les lectures d'absorbance contre la concentration d'amidon. Ceci est la courbe standard qui vous permet de déterminer la concentration d'une solution qui a une lecture d'absorbance donnée.

Détermination amylase Concentration

1

Nettoyez tous les tubes à essai de la première partie du test. Maintenir le tube blanc pour une utilisation ultérieure.

2

Obtenir un échantillon de sang du patient. Placer l'échantillon dans une centrifugeuse et on sépare les globules rouges du plasma sanguin.

3

Remplir un tube d'essai avec 9 ml d'eau déminéralisée et 1 ml de plasma sanguin. Ceci est une dilution au 1/10 de plasma. Mélanger soigneusement le tube et la pipette 1 ml de la solution dans un second tube à essai. Nommez les deux tubes avec leur contenu.

4

Préparez-vous à effectuer un test chronométré. Avoir un chronomètre à portée de main et mis en place sept tubes à essai avec des cuvettes dans le porte-tube à essai. Vous prendrez des lectures toutes les deux minutes une fois que le test commence. Notez l'heure exacte et absorbance lecture pour chacun des points de données sept. Remplir chacun des sept tubes à essai avec 2 ml d'eau déminéralisée.

5

Ajouter 9 ml de la solution d'amidon pour le tube à essai qui a le 1 ml de dilution à 1:10 du plasma. Dès que vous commencez à ajouter la solution d'amidon, démarrer le chronomètre. Mélanger le tube à essai bien et pipette 1 ml de la solution d'amidon / plasma dans la première des sept tubes à essai. Noter le temps. Ajouter 1 goutte de solution KI / iode pour le tube à essai et mélanger.

6

Transfert à la cuvette, essuyez l'extérieur et enregistrer l'absorbance. Répétez le processus avec les six tubes d'essai restants à deux minutes d'intervalle. A l'issue de l'essai chronométré, vous devriez avoir des lectures pour le temps réel et l'absorbance pour les temps travées de 0, 2, 4, 6, 8, 10 et 12 minutes.

7

Utilisez la courbe standard pour trouver la concentration de l'amidon pour chacun des points de données sept. Ces points seront en baisse avec le temps. L'amylase digère l'amidon et au fil du temps consomme tout l'amidon disponible.

8

Graphiquement les points de données pour le test chronométré que la concentration d'amidon en fonction du temps. La pente de cette courbe indique la quantité d'amylase dans l'échantillon de plasma.